Приготовление растворов

см. так-же Виды криопротекторов, Потребность в реактивах, Перерасчет состава, Технология заморозки

Отслеживание новостей по криопротекторам

m-RPS-2, новые washout solution and the perfusate vehicle solution, VM-1

http://www.cryonics.org/newsolutions.html

Последние коммерчески доступные наработки 21CM

https://secure2.csz.com/21cm/order.html

Приготовление растворов на базе BPS-7 (как в сентябре 2008)

Развешиваются реактивы на 20-литровые порции перфузата.
Глицерин смешивается с водой (чтобы не грелся потом) в разных концентрациях (для разных этапов).
Готовится концентрированный (x4) базовый перфузат (порция 5 л - на голову, 4x5 л - на тело) - раствор маннитола смешивается с раствором магния, туда добавляются сухие реактивы, размешивается.
Концентрированный перфузат смешивается с глицерином нужной концентрации.
Раствор фильтруется.

Расчёты указаны в файле "Перфузат BPS-7.xls" (https://dl-web.getdropbox.com/get/KrioRus/Organisation/Технология/Перфузия%20криопротектором/BPS%20-%20Предложения%20и%20соображения%20Дарвина/Перфузат%20BPS-7.xls?w=faec9e67 - возможно, что эта ссылка не сработает, если параметр после w меняется)

12.04.2009 приезжал Клинков, разбирался с развесом реактивов.

Приготовление растворов по протоколу CI

Развес химикатов

Вещество	вес для пром. р-ра	вес для перф. р-ра
KCl	11,2 г	67,2 г
NaHCO₃	4,2 г	25,2 г
KH₂PO₄	4,9 г	29,4 г
MgCl₂•6H₂O	2,45 г	14,7 г
Глюкоза	162,2 г	973,2 г
Маннитол	45,55 г	0 г

Подготовка химикатов к использованию

см. например метод удаления кристаллов из маннитола

Instructions for making washout and perfusate.

Промывочный раствор:

Для приготовления одного литра промывочного раствора используйте следующий состав:

Вещество	вес на литр
KCl	2,24 г/л
NaHCO₃	0,84 г/л
KH₂PO₄	0,98 г/л
MgCl₂•6H₂O	0,49 г/л
Глюкоза	32,44 г/л
Маннитол	9,11 г/л

Растворите эти соединения в одном литре дистиллированной воды.

Для доведения pH раствора до 7,6 растворите 1г KOH в 2 мл дистиллированной воды и добавьте по 15 капель полученного раствора на каждый литр промывочного раствора.

Прим. Владимира: Эта рекомендация исходит из предположения, что вы используете воду с повышенной кислотностью, но вода может быть также и щелочной. Для приведения ее к нейтральному состоянию (pH=7.6) помимо щелочи (KOH) может потребоваться также и кислота (HCL). Измерения значения pH проще всего проводить не с помощью соответствующих приборов (они требуют калибровки), а с помощью капельного теста - раствор индикатора и таблицу калибровочных цветов можно найти в магазинах, торгующих принадлежностями для аквариумов или бассейнов.

Промывочный раствор отфильтровать на .45um (um — микрон) фильтре. Мы пользуемся .45um вакуумным фильтром, поставляемым Fisher Scientific.

Прим. Владимира: В 2004 году немецкая компания FluXXion начала производить фильтры на основе довольно старого патента фирмы Philips, в том числе и с таким диаметром отверстий. Фильтры на основе новой технологии требуют для своей работы заметно меньших давлений (около 0.1 атмосферы) и действуют быстрее. Отметим, что размеры около 0.5 микрона сравним с размерами большинства бактерий, т.е. такой фильтр их задерживает.

Для подготовки пациента используется 5 л промывочного раствора.

КТР - концентрированный транспортный раствор (по 250 мл)

''Порция КТР в 250 мл идёт на один литр глицеринового перфузата (разной глицериновой концентрации).

Вещество	вес на 250 мл КТР
KCl	2,24 г/л
NaHCO₃	0,84 г/л
KH₂PO₄	0,98 г/л
MgCl₂•6H₂O	0,49 г/л
Глюкоза	32,44г/л

Растворите эти соединения в 250 мл дистиллированной воды.

Для доведения pH раствора до 7,6 растворите 1 г KOH в 2 мл дистиллированной воды и добавьте 15 капель полученного раствора в транспортный раствор.

Транспортный раствор отфильтровать на .45um фильтре.

Перфузат

На каждый литр перфузата приготовте 250 ml концентрированного транспортного раствора и доведите pH до 7,6, как описано выше. Затем добавьте соответствующие количества глицерина и дистиллированной воды, следуя приведенной ниже методике.

Например, чтобы получить 20%-ный (объем/объем) глицериновый перфузат, смешайте 250 мл полученного концентрированного транспортного раствора с 200 мл глицерина и 550 мл дистиллированной воды.

Для получения глицеринового перфузата различной концентрации используйте следующую методику:

10%-ный глицериновый перфузат — 100 мл глицерина + 250 мл концентрированного транспортного раствора + 650 мл дистиллированной воды.
20%-ный глицериновый перфузат — 200 мл глицерина + 250 мл концентрированного транспортного раствора + 550 мл дистиллированной воды.
40%-ный глицериновый перфузат — 400 мл глицерина + 250 мл концентрированного транспортного раствора + 350 мл дистиллированной воды.
75%-ный глицериновый перфузат — 750 мл глицерина + 250 мл концентрированного транспортного раствора.

Для перфузии одного пациента мы используем всего: 5 литров 10%-ного глицеринового перфузата, 5 литров 20%-ного глицеринового перфузата, 8 литров 40%-ного глицеринового перфузата и 12 литров 75%-ного глицеринового перфузата.

см. Виды криопротекторов, Потребность в реактивах, Перерасчет состава, Технология заморозки